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RNA和DNA印迹法

简化净化

RNA和DNA的鉴定和定量

在分子生物学研究中,RNADNA提取和检测对于基因发现和定位很关键,因此被用于检测基因遗传疾病、法医研究和其它诊断应用。RNADNA印迹法可以鉴定和定量RNADNA。这两种方法的主要优点是可固定核酸图谱,可使用大分子探针。 

 

RNA印迹法用于RNA检测,其包括复杂的提取和杂交步骤,能够使标记的探针结合目标RNA序列。DNA印迹法用于检测大型、复杂DNA样品中的特定DNA序列。该方法还可用于测定酶切片段的分子量以及测量不同样品的相对数量。颇尔实验室提供具有顶级灵敏度、低本底和批次间一致性的产品,用于所有放射性和非放射性检测方法。

 

RNA印迹法的第一步需要提取生物样品中的RNA。提取RNA后,可通过凝胶电泳按尺寸大小分离RNA样品。然后将凝胶涂抹到尼龙或硝酸纤维素过滤器上,固定RNA。为鉴定RNA,使用专门设计用于目标序列的放射性或化学标记探针将膜放入杂交缓冲液中。这使得探针与膜印迹上的目标序列对应RNA杂交。

 

杂交完成后,洗去膜上的未结合探针。最后,通过放射自显影术或化学发光反应检测标记探针。这两种方法都会在X光片上形成暗带,可用于对比不同样品中的目标序列表达模式。

 

DNA印迹法的第一步是完全消化DNA,从而使用限制性内切酶进行分析。复杂片段混合物进行凝胶电泳,按尺寸大小分离。使用碱将凝胶中的限制酶断片变性,然后通过印迹法将其转移至尼龙或硝酸纤维膜上。印迹完成后,在特定杂交条件下,使用特定放射性同位素标记的DNA探针培养过滤器。然后洗去过滤器上未接合的过多探针,使用放射自显影术显示探针杂交的DNA片段。

 

颇尔公司的尼龙膜被视为核酸鉴定用黄金标准,已使用25年以上。我们的Biodyne® ABiodyne® BBiodyne®增强型滤膜可产生顶级的灵敏度、低本底和批次间稳定性,可用于所有放射性和非放射性检测方法。这些滤膜本性亲水,且易于润湿。颇尔Biodyne®滤膜的稳定性和耐用性可确保循环多次杂交、脱落和重新标记后不会破裂、收缩或撕裂。